¿Qué coeficiente de extinción debo usar?

Para una mezcla general de proteínas, a menudo se usa 1.0 (donde 1 Abs = 1 mg/mL). Para proteínas específicas (ej. IgG, BSA), use sus valores conocidos.

¿Afecta el ADN la lectura?

Sí, los ácidos nucleicos absorben a 280nm y pueden inflar el resultado.

¿Qué métodos existen para medir la concentración de proteínas?

Los dos enfoques principales son la medición espectrofotométrica a 280 nm (rápida, sin reactivos, pero afectada por contaminación de ácidos nucleicos) y los ensayos colorimétricos como Bradford (con el colorante Coomassie) o BCA (con química basada en cobre). Los métodos colorimétricos suelen ser más sensibles y específicos, pero requieren curvas estándar y reactivos adicionales.

¿Cómo calculo la concentración de proteínas a partir de la absorbancia a 280 nm?

Use la fórmula de Beer-Lambert reordenada: C = (A280 / (ε × longitud del paso)) × masa molecular × factor de dilución. Por ejemplo, para IgG con ε = 210,000 M⁻¹cm⁻¹, PM = 150,000 g/mol, A280 = 280, longitud = 1 cm y dilución = 10: C = (280 / (210,000 × 1)) × 150,000 × 10 = 2,000 mg/mL.

¿Cómo convierto la concentración de mg/mL a µg/mL?

Multiplique el valor en mg/mL por 1,000. Por ejemplo, 2 mg/mL × 1,000 = 2,000 µg/mL. Esta conversión se usa frecuentemente al reportar muestras de baja concentración donde µg/mL es la unidad más práctica.

¿Cómo funciona el ensayo Bradford de proteínas?

El ensayo Bradford usa el colorante Azul Brillante de Coomassie G-250, que normalmente es de color marrón-rojo pero cambia a azul al unirse a proteínas desnaturalizadas en condiciones ácidas. Cuanto más intenso el azul, mayor la concentración de proteína. Si no hay proteína, la solución permanece marrón. La intensidad se lee a 595 nm y se compara con una curva estándar.

Calculadora de Concentración de Proteínas - Bunny Calculator

Guia Completa de Usuario

Nuestra Calculadora de Concentración de Proteínas estima la cantidad de proteína. Así es como se usa:

Paso 1: Ingrese la absorbancia a 280 nm (A280).

Paso 2: Ingrese el Coeficiente de Extinción (ε). Use 1.0 si no está seguro.

Paso 3: Ingrese la longitud del paso óptico (cm) y el factor de dilución.

Paso 4: Haga clic en 'Calcular' para ver el resultado en mg/mL.

La Formula Matematica

Concentration (mg/mL) = (A280 / ε) × Dilution Factor

Basado en la Ley de Beer-Lambert:

Concentración = A280 / (ε × l)

Donde: - ε = Coeficiente de extinción - l = Longitud del paso (cm) - A280 = Absorbancia

Acerca de Calculadora de Concentración de Proteínas

La concentración de proteínas es un valor fundamental en bioquímica y biología molecular. Saber cuánta proteína hay en una muestra es esencial antes de realizar ensayos, preparar geles o añadir reactivos — usar muy poco da resultados débiles, y demasiado puede saturar o interferir con las mediciones.

Esta calculadora usa cuantificación espectrofotométrica a 280 nm, aprovechando que los aminoácidos aromáticos (principalmente triptófano y tirosina) absorben luz UV a esa longitud de onda. La técnica es rápida, no requiere reactivos adicionales y no destruye la muestra. Sin embargo, depende de cinco valores clave:

Absorbancia (A280): Medida con un espectrofotómetro. Captura cuánta luz UV absorbe la muestra a 280 nm, donde la mayoría de las proteínas muestran su pico de absorción.

Coeficiente de Extinción (ε): Una constante específica de cada proteína que cuantifica cuánto absorbe la molécula. Varía según la composición de aminoácidos y debe obtenerse del manual del fabricante o calcularse.

Longitud del Paso: El diámetro interior de la cubeta, casi siempre 1 cm en configuraciones estándar de laboratorio.

Masa Molecular: La masa atómica de la proteína en g/mol, necesaria para convertir de unidades molares a mg/mL.

Factor de Dilución: Se aplica cuando la muestra fue diluida antes de la medición. Multiplique la absorbancia por este número para recuperar la concentración original.

Valores de Referencia Clave: Coeficientes de extinción y masas moleculares más comunes — BSA: ε = 43,824 M⁻¹cm⁻¹, PM = 66,463 g/mol. IgG: ε = 210,000 M⁻¹cm⁻¹, PM = 150,000 g/mol. Lisozima: ε = 37,901 M⁻¹cm⁻¹, PM = 14,000 g/mol. Estreptavidina: ε = 176,000 M⁻¹cm⁻¹, PM = 55,000 g/mol. Valores validados para absorbancia a 280 nm.

Preguntas Frecuentes

Calculadora de Concentración de Proteínas